人脐带间充质干细胞移植治疗大鼠深静脉血栓(3) - 湖北农机化杂志社投稿

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人脐带间充质干细胞移植治疗大鼠深静脉血栓(3)

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2.4 各组血栓内新生血管数的比较 CD34免疫组织化学染色显示，低倍镜下小血管多位于血栓周边，细胞移植组的血栓内新生血管数量明显多于对照组，见图4。高倍镜下可见被染成棕褐色的管腔样结构的纵切面及横切面，且部分管腔内可见红细胞，见图5。各组平均血管密度：不同处理组间血栓的血管密度差异有显著性意义(P < 0.01)；组间两两比较示实验组1的平均血管密度比对照组高1.00(个/ 400倍视野)(95%CI：-)，差异无显著性意义(P= 0.810)；实验组2的平均血管密度比对照组高3.65(个/400倍视野)(95%CI：)，差异有显著性意义(P=0.018)；实验组3的平均血管密度比对照组高6.35(个/400倍视野)(95%CI：)，差异有显著性意义(P <0.01)；实验组3的平均血管密度比实验组2高2.70(个/400倍视野)(95%CI：-)，差异无显著性意义(P=0.07)，见表1。

图1 大鼠肾静脉以下至髂静脉以上平面的下腔静脉及其属支形态Figure 1 Inferior vena cava and its tributaries below the renal vein and above the iliac vein in rats图注：粗箭头示下腔静脉的属支，予完全结扎；细箭头示距离左肾静脉以下约2 mm处，作为下腔静脉结扎点。RV：肾静脉。

图2 镜下观察原代培养的人脐带华通氏胶间充质干细胞Figure 2 Primary cultured human umbilical cord mesenchymal stem cells under microscope图注：图 A为原代培养三四天后能看到少量细胞从组织边缘爬出，多呈圆点状(×100)；B为培养8 d后见爬出明显增多，细胞变成短棒状、有突起的长梭状(×100)；C为培养16 d后细胞融合达80%-90%，低倍镜下见呈旋涡生长，此时予以传代(×40)。

图3 各组大鼠深静脉血栓组织切片苏木精-伊红染色结果(×40)Figure 3 Hematoxylin-eosin staining of deep vein thrombosis of rats in each group (×40)图注：图A为对照组，偶在血栓与血管壁之间见少量溶解裂隙，血栓基本充满管腔；图B为实验组1，血栓与血管壁之间裂隙较对照组稍有增加，但血栓溶解仍有限；图C为实验组2：血栓与血管壁之间以及血栓内溶解显著增加，较对照组及实验组1明显；图D为实验组3：血栓周围及内部的溶解进一步增加。VW：静脉管壁；T：血栓组织。

图4 各组大鼠深静脉血栓组织切片CD34免疫组织化学染色形态(×40)Figure 4 CD34 immunohistochemical staining of deep vein thrombosis of rats in each group (×40)图注：图A为对照组；B为实验组1；C为实验组2；D为实验组3。低倍镜下可见小血管多位于血栓周边，细胞移植组的血栓内新生血管数量明显多于对照组。箭头所示为被CD34染成棕褐色的小血管。

图5 血栓内小血管(CD34免疫组织化学染色，×400)Figure 5 The microvessels in the thrombosis (CD34 immunohistochemical staining, ×400)图注：图A-D分别为为血栓左上角、右上角、左下角及右下角。箭头示血栓内小血管被染成棕褐色，可见管腔的纵切面及横切面，部分管腔内可见红细胞。

表1 各组大鼠血栓血管密度及溶解率对比 (±s)Table 1 Comparison of vascular density and dissolution rate among groups表注：不同处理组间血栓的溶解率差异无显著性意义(P=0.077)；不同处理组间血栓的血管密度差异具有显著性意义(P < 0.001)。组别 n 血管密度(个/400倍视野) 溶解率(%)对照组 4 8. 5.实验组 1 4 9. 6.实验组 2 5 11. 8.实验组 3 5 14. 9. F值 14.899 2.822 P值 < 0.001 0.077

3 讨论 Discussion

3.1 血管新生对血栓机化的影响血栓机化的本质即是由肉芽组织逐渐取代血栓的过程，新血管的形成发挥重要作用，这不仅有利于肉芽组织的存活，亦能增加单核细胞、炎性因子向局部的募集[22]，并且这些新形成的小血管与体循环相通，可以恢复局部血流[23-24]。此外，国内有研究者发现在大鼠下腔静脉血栓模型建立7 d后，血栓机化和新生毛细血管明显，而在之后则变化缓慢[25]。所以该实验选择在第7天进行血管计数，并通过计算血栓横切面上单位面积的小血管数量，发现移植了人脐带间充质干细胞的实验2组和实验3组新生血管数明显增多，认为人脐带间充质干细胞移植能增加血栓内血管新生，而促进机化。通过计算剩余血栓面积占静脉管腔比值，发现移植细胞组与对照组无明显差异，认为人脐带间充质干细胞移植对血栓溶解及管腔再通无显著作用。

3.2 人脐带间充质干细胞的促血管新生特性目前关于人脐带间充质干细胞促血管新生的确切机制仍在研究中，主要认为有两方面作用：①间充质干细胞分化为内皮细胞，参与构成新生血管。但这方面尚存在争议，Aguilera等[26]研究结果认为脐带沃顿氏胶间充质干细胞可以分化为内皮细胞，并且显著促进了伤口处血管生成及肉芽组织生长。但是，亦有研究者提出反对意见，认为其促血管新生主要依靠旁分泌作用，而直接分化作用很小[27-28]；②脐带间充质干细胞的旁分泌功能。这方面已有广泛认可，研究发现其能分泌血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子及肝细胞生长因子等生物活性分子，而建立促血管新生微环境，对新血管生成和微血管网络形成发挥重要作用[29-31]。

文章来源：《湖北农机化》网址: http://www.hbnjhzz.cn/qikandaodu/2020/1229/497.html